分光光度計的基本工作原理是基于物質(zhì)對光(對光的波長)的吸收具有選擇性,不同的物質(zhì)都有各自的吸收光帶。
所以,當(dāng)光色散后的光譜通過某一溶液時,其中某些波長的光線就會被溶液吸收。在一定的波長下,溶液中物質(zhì)的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關(guān)系,即符合比爾定律。
T=I/Io lg(Io/I)=εcb
式中,T為透過率,Io為入射光強(qiáng)度,I為透射光強(qiáng)度,A為消光值(吸光度),ε為吸收系數(shù),b為溶液的光徑長度,c為溶液的濃度。從以上公式可以看出,當(dāng)入射光、吸收系數(shù)和溶液厚度一定時,透光率是根據(jù)溶液的濃度而變化的。
分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。
注意事項:
1、該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi),使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上,室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風(fēng),防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
2、使用本儀器前,使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理,以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前,應(yīng)該對儀器的安全性能進(jìn)行檢查,電源接線應(yīng)牢固,通電也要良好,各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確,然后再按通電源開關(guān)。
3、在儀器尚未接通電源時,電表指針必須于“0”刻線上,若不是這種情況,則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。